Diversi tipi di HPLC e come evitare errori

La cromatografia liquida ad alte prestazioni, comunemente denominata HPLC, rappresenta una tecnica analitica fondamentale utilizzata per la meticolosa separazione, identificazione e quantificazione dei singoli componenti all'interno di una miscela.

 

Funzionando sui principi fondamentali della cromatografia su colonna, l'HPLC sfrutta la spettroscopia per discernere e misurare i vari costituenti presenti nella miscela.

 

L'evoluzione della cromatografia, dalle tradizionali colonne in vetro a bassa pressione della cromatografia liquida (LC) degli anni '60 alle colonne metalliche ad alta pressione dell'HPLC, rappresenta un progresso significativo nella metodologia analitica.

 

L'HPLC rappresenta un miglioramento significativo rispetto alla cromatografia liquida tradizionale, poiché funziona a pressioni elevate fino a 400 atmosfere, garantendo un processo di separazione più efficiente e rapido.

 

Tipi di HPLC

 

1. Fase normale:

   - Nell'HPLC in fase normale, il materiale di riempimento della colonna è polare, come la silice, mentre la fase mobile è non polare. Questo metodo è ideale per separare composti sensibili all'acqua, isomeri geometrici, isomeri cis-trans e composti chirali.

 

2. Fase inversa:

   - L'HPLC a fase inversa utilizza un materiale di riempimento della colonna non polare, come C18, e una fase mobile costituita da acqua miscelata con un solvente miscibile come il metanolo. È adatto per separare campioni polari, non polari, ionizzabili e ionici.

 

3. Scambio ionico:

   - La cromatografia a scambio ionico prevede un materiale di riempimento della colonna con gruppi ionici, mentre la fase mobile è generalmente costituita da una soluzione tampone. Questa tecnica viene utilizzata per separare efficacemente anioni e cationi.

 

4. Esclusione dimensioni:

   - La cromatografia ad esclusione dimensionale funziona consentendo alle molecole di diffondersi nei pori all'interno di un mezzo poroso, separandole in base alle loro dimensioni relative rispetto alla dimensione dei pori. Le molecole più grandi eluiscono per prime, seguite da quelle più piccole, rendendolo utile per la separazione dei composti in base alle dimensioni.

 

Evitare errori comuni nell'HPLC

 

In vari settori che spaziano da quello farmaceutico, alle scienze ambientali, agli alimenti e alle bevande e altro ancora, la cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) rappresenta uno strumento analitico indispensabile, svolgendo un ruolo fondamentale nella separazione e identificazione di composti chimici complessi con una precisione senza pari. Nonostante la sua diffusa adozione e l'innegabile utilità, il regno dell'HPLC non è immune alle sfide.

 

Nella sua vasta applicazione, persistono alcuni errori, capaci di mettere a repentaglio la precisione e l'affidabilità dei risultati dell'HPLC. È fondamentale che professionisti e ricercatori rimangano vigili e proattivi nell'affrontare queste potenziali insidie ​​per garantire l'integrità dei loro risultati analitici.

 

Evitare errori comuni è fondamentale per ottenere risultati accurati e affidabili nella cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). Ecco quattro trappole da cui evitare:

 

1. Selezione colonna errata: La colonna è un componente vitale nell'HPLC, in quanto influisce sulla separazione e sulla risoluzione dei picchi. Scegliere la colonna sbagliata in base alle caratteristiche del campione o ai requisiti di separazione può portare a risultati scadenti. È essenziale che le proprietà della colonna corrispondano a quelle del campione per garantire una separazione e un rilevamento ottimali.

 

2. Composizione non corretta della fase mobile: La fase mobile svolge un ruolo chiave nel facilitare la separazione dei composti sulla colonna. L'utilizzo di una composizione di fase mobile non idonea può provocare una separazione incompleta o una coeluizione dei composti, compromettendo l'accuratezza dei risultati. Un'attenta selezione e ottimizzazione della fase mobile sono fondamentali per una separazione riuscita.

 

3. Preparazione del campione inadeguata: La preparazione del campione influenza in modo significativo l'accuratezza e la precisione dei risultati in HPLC. Un'estrazione o una purificazione insufficiente del campione può portare a una bassa intensità del segnale, una scarsa risoluzione o una quantificazione imprecisa. La corretta preparazione del campione garantisce risultati riproducibili e affidabili.

 

4. Tralasciare la manutenzione dello strumento: La manutenzione e la calibrazione regolari del sistema HPLC sono essenziali per ottenere prestazioni ottimali. La mancata esecuzione della manutenzione ordinaria può comportare una forma inadeguata dei picchi, una deriva del tempo di ritenzione o una diminuzione della sensibilità. Il rispetto del programma di manutenzione e calibrazione del produttore è fondamentale per ottenere risultati affidabili.

 

La fine

 

In conclusione, comprendere le diverse tipologie di tecniche HPLC è essenziale per selezionare il metodo più adatto alle specifiche esigenze analitiche. Inoltre, essere consapevoli ed evitare gli errori comuni nella pratica HPLC è fondamentale per ottenere risultati accurati e affidabili. Combinando la conoscenza dei tipi di HPLC con diligenti strategie di prevenzione degli errori, ricercatori e professionisti possono migliorare la qualità e l'integrità del loro lavoro analitico.